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Arachis hypogaea L. Embryo Leaflet: Establishment and Optimization of in Vitro Regeneration System
LITingting, ZHANGJiancheng, CHIXiaoyuan, JIANGXiao, LIUXiaoqin
Chin Agric Sci Bull ›› 2026, Vol. 42 ›› Issue (9) : 145-154.
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Abbreviation (ISO4): Chin Agric Sci Bull
Editor in chief: Yulong YIN
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Arachis hypogaea L. Embryo Leaflet: Establishment and Optimization of in Vitro Regeneration System
The purpose of this study was to establish an efficient in vitro regeneration system of embryo lobules of different peanut varieties, and to provide strong technical support for genetic improvement and biotechnology application of peanut. In this experiment, the embryo lobules of two different peanut varieties ‘Laiyang Silihong’ and ‘83’ (‘Yunhua 24’) were used as explants, and the effects of different plant growth regulators and seedling hardening time on the establishment of embryo lobule regeneration system were studied by tissue culture method. The results showed that the most suitable growth regulator for ‘Laiyang Silihong’ was 3.25 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA for bud cluster induction, 1.5 mg/L TDZ+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3 for bud cluster extraction, 2.0 mg/L TDZ+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L GA3 for bud cluster elongation, and 2.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 2,4-D for rooting culture. The most suitable growth regulator for ‘83’ (‘Yunhua 24’) embryo leaflet bud induction was 3.25 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA, the bud cluster was 1.5 mg/L TDZ+4.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L GA3, the bud cluster elongation was 2.0 mg/L TDZ+3.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+2.0 mg/L GA3, and the rooting culture was 2.5 mg/L NAA+0.1 mg/L 2,4-D. The best transplanting time of the two peanut varieties was 7 days, and the fruit setting rates of ‘Laiyang Silihong’ and ‘83’ (‘Yunhua 24’) were 57.63% and 48.67%, respectively. In this study, the in vitro regeneration system of embryo leaflets of two peanut varieties, ‘Laiyang Silihong’ and ‘83’ (‘Yunhua 24’), was successfully established. The results not only improved the peanut tissue culture technology system, but also provided important transgenic technology platform support for subsequent peanut genetic improvement research and functional gene mining.
peanut / embryo leaflet buds / in vitro regeneration system / tissue culture method / plant growth regulators
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以成熟花生种子的胚小叶为外植体,建立一套高效的花生再生体系,为进行外源基因的遗传转化奠定基础。研究结果表明,不同基因型胚小叶再生能力差异显著,以丰花2号为最佳基因型。诱导培养基MSB+6-BA 7mg/L+NAA 0.6mg/L+ AgNO3 2mg/L对丰花2号不定芽诱导和分化具有较好的效果,成苗率可高达57.22%;最适宜的分化和伸长培养基为MSB+6-BA 3mg/L;在生根培养基MSB+NAA 1.5mg/L(或1mg/L)中,再生幼苗96%以上可生根。再生植株经炼苗移栽后90%以上可正常生长。
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以14个花生品种为材料,对花生组织培养及植株再生进行了研究。将花生成熟胚幼叶、子叶和下胚轴外植体接种到添加0~2 mg/L NAA 和0~10 mg/L BAP的MSB5(MS无机盐 + B5有机)培养基上诱导愈伤,再转到添加0~10 mg/L BAP的分化培养基上诱导不定芽。结果表明,诱导培养基中添加的激素及其浓度对以后在分化培养基上不定芽分化有重要作用,以添加1 mg/L NAA 和6 mg/L BAP最利于不定芽分化;分化培养基中添加4 mg/LBAP利于不定芽伸长及植株再生;幼叶外植体分化不定芽频率明显高于子叶和下胚轴;不同基因型不定芽分化率存在明显差异,白沙1016和花育23幼叶外植体获得了较高的不定芽分化率,分别达到91.8%和88.5%。再生苗经生根培养和驯化后,移栽花盆可正常开花结果。
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为进一步优化刺梨叶片愈伤组织诱导条件,本试验以‘贵农1号’、‘贵农2号’、‘贵农5号’、‘贵农7号’4个不同基因型刺梨叶片为试材,采用组织培养法研究预处理、取样时间、植物生长调节剂、抗褐化剂对叶片愈伤组织诱导及降低褐化率的影响。结果表明:100 mg/LVc浸泡12 h后,可显著提高4个基因型叶片愈伤组织诱导率,降低其褐化率,其中‘贵农1号’诱导率最高为97.44 %;春季是不同基因型叶片最佳取材时间,3月份叶片愈伤组织诱导率均达到最高值且褐化率最低;适合‘贵农1号’和‘贵农2号’叶片愈伤组织诱导的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA,而‘贵农5号’和‘贵农7号’叶片愈伤组织诱导最适宜的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+1.0 mg/LTDZ;3种抗褐化剂对4种基因型刺梨叶片愈伤组织增殖培养的效果大小为AgNO<sub>3</sub>>柠檬酸>PVP;添加柠檬酸或AgNO<sub>3</sub>可明显降低刺梨叶片愈伤组织褐化率,其中以2.0 g/L柠檬酸或0.4 g/LAgNO<sub>3</sub>最为适宜,4个基因型叶片愈伤组织褐化率均达到最低值。该试验获得了4种基因型愈伤组织诱导的最适宜生长调节剂组合,降低了褐化率,为后续离体再生体系的建立奠定了基础。
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