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ITS Sequence Analysis and Isolation of Fungal Pathogens in Major Tobacco Producing Areas of Yunnan Province
BAIZili, CHENZebin, XUShengguang, PANXiaomei, FANZhiwei, SUYuan, TIANZhicheng, YANGJiaxin, XIANGJinxi
Chin Agric Sci Bull ›› 2026, Vol. 42 ›› Issue (18) : 197-202.
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Abbreviation (ISO4): Chin Agric Sci Bull
Editor in chief: Yulong YIN
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ITS Sequence Analysis and Isolation of Fungal Pathogens in Major Tobacco Producing Areas of Yunnan Province
To identify and analyze the species composition of pathogenic fungi isolated from diseased tobacco plants in the major tobacco-growing regions of Yunnan, newly infected tobacco plants and their tissues collected from these areas were used as test materials. Fungal identification was performed by ITS sequence PCR amplification and sequencing, yielding data for 39 fungal isolates. The obtained sequences were compared with those in the US National Center for Biotechnology Information (NCBI) database for homology analysis, and a phylogenetic tree was constructed using MEGA software. The results showed that 33 isolates could be identified to the species level, with high sequence homology to 12 known fungal species, whereas the remaining six isolates were identified only to the genus level. Among the isolates, 13 belonged to the genus Fusarium, accounting for 33% of the total. In total, 39 fungal isolates were recovered from diseased plants in Yunnan tobacco-growing areas; ITS analysis identified 12 species across 15 taxonomic groups, with Fusarium spp. representing the highest proportion and constituting the dominant group.
Yunnan / tobacco / pathogenic fungi / isolation / ITS sequence / identification / Fusarium
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青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum造成的烟草青枯病是烟草主要毁灭性病害之一。本研究采用牛津杯法从运城盐湖湖岸土壤中筛选获得一株对烟草青枯病菌具有较好拮抗效果的菌株FY-C；并进一步分析了菌株FY-C的抑菌谱、对青枯病菌的潜在生防效果。结果显示，经菌株FY-C无菌滤液处理24 h后的青枯病菌细胞壁降解，内容物外渗；且对青枯病菌产生的抑菌活性表现出较强的热稳定性、酸碱稳定性。通过形态、生理和系统发育分析将菌株FY-C鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis，且菌株FY-C对多种病原真菌都有抑制作用。促生试验显示，菌株FY-C发酵液灌根处理烟草45 d后，株高和鲜重分别比对照提高28.54%和24.90%；防治试验显示，菌株FY-C发酵液灌根预处理5 d后接种青枯病菌较对照处理（LB处理）防效增长了59.74%。此外，发现菌株FY-C具有分泌纤维素酶、蛋白酶及生成生物膜的能力。综上，贝莱斯芽胞杆菌FY-C具有较大的生防潜力，能够为植物病害的绿色防控提供研究思路。
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该研究采用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基从烟草废水中分离红色酵母菌，通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定，并初步探讨其发酵马铃薯葡萄糖水（PDW）产油脂和色素的潜力。结果表明，从烟草废水中分离到一株红色酵母菌YH0902，并鉴定其为一株近玫色锁掷孢酵母（Sporidiobolus pararoseus）。菌株YH0902在马铃薯葡萄糖水（PDW）中培养时，细胞内可积累类胡萝卜素和油脂，30 ℃、150 r/min条件下培养4 d，菌体湿质量为（48.53±0.36） g/L，干质量为（10.63±0.15） g/L，胞内色素产量为（4.33±0.19） mg/L，油脂产量为（3.30±0.17） g/L。因此，菌株YH0902在微生物源天然色素及油脂开发领域具有一定的应用前景。
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定期转种法和低温冷冻保存法是临床实验室最常用的两种真菌保存方法,为比较两种方法保藏致病真菌活性的能力,本研究使用两种保藏方法对实验室689株致病真菌保藏5年后进行检测。定期转种法是将菌落接种于马铃薯斜面培养基并将其储存在4℃冰箱,每6个月转种1次。低温冷冻法是挑取马铃薯斜面培养基上生长良好的菌落于无菌10%甘油中,放置在-80℃储存。保藏5年后,将两种方法保藏的菌株转种复苏,比较菌株的复活率。对于念珠菌属Candida、新生隐球菌Cryptococcus neoformans、毛癣菌属Trichophyton、曲霉属Aspergillus和孢子丝菌属Sporothirix真菌,两种方法的菌株复活率无统计学差异;对于小孢子菌属Microsporum真菌和马尔尼菲蓝状菌Talaromyces marneffei,使用低温冷冻法保藏的菌株复活率高于定期转种法保藏的菌株复活率;对于着色霉属Fonsecaea真菌,低温冷冻法保藏的菌株复活率低于定期转种法保藏的菌株复活率。因此,我们认为对于常见致病真菌的长期保藏,使用10%甘油作为保护剂的低温冷冻法优于定期转种法,但其不适用于着色霉属Fonsecaea真菌的长期保藏。
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链霉菌FT05W是一株对烟草黑胫病等土传真菌病害具有良好拮抗作用的生防放线菌。本研究利用Miseq PE300高通量测序平台对链霉菌FT05W基因组进行序列测定，共获得6914188个reads，通过SPAdes软件对序列进行拼接共得1836个contigs，其基因组全长为7699129 bp，GC比为71%，其中编码基因序列长度为6037181 bp，预测出7434个蛋白编码基因（GenBank登录号：NZ_QGMR00000000），预测编码7323个蛋白。获得的基因注释信息为今后深入开展其在烟草上的生物防治机理研究奠定了重要的基础，有助于推动烟草生防链霉菌功能基因的挖掘与利用，为烟草生防链霉菌FT05W的进一步开发与应用提供理论依据。利用MEGA 6.06构建链霉菌FT05W的几丁质酶家族基因系统发育树，共鉴定出7个几丁质酶家族基因，其中6个为18家族几丁质酶基因，1个为19家族基因。
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